目的 了解和掌握山鸡椒雌花花芽分化的形态特征及碳氮营养规律，为山鸡椒人工栽培及杂交育种提供参考依据。 方法 采用石蜡切片法观察山鸡椒雌花花芽分化的组织解剖结构，采用生理试剂盒-分光光度法测定雌花不同分化时期的可溶性糖、淀粉、可溶性蛋白、碳氮比等碳氮营养指标。 结果 表明：（1）山鸡椒雌花花芽分化经过未分化期-花序原基分化期-苞片原基分化期-花原基分化期-花器官分化期5个时期。（2）叶片可溶性糖含量随着花芽分化的发展呈不断升高的趋势，最高可达65.07 mg·g^-1。叶片淀粉含量随着分化时期的推进呈先升后降的趋势，其最高值出现在苞片原基分化期，达到81.30 mg·g^-1，最低值出现在花器官分化期，为52.19 mg·g^-1。（3）叶片可溶性蛋白含量在花芽前3个分化期呈持续下降趋势，从61.32 mg·g^-1下降到52.48 mg·g^-1，之后基本保持稳定。叶片中的碳氮比在花芽前3个分化期呈持续上升趋势，从1.49上升至2.61，之后基本维持在较高水平。 结论 山鸡椒雌花花芽分化的内部形态特征与雄花基本一致，雌花花芽分化分为5个时期。山鸡椒雌花花芽分化过程中，叶片中可溶性糖不断升高，而可溶性蛋白下降明显，碳氮比升高且保持在较高水平。

目的 筛选适合山苍子愈伤组织分化的激素比例，研究其对抗生素的耐受性，构建山苍子遗传转化体系。 方法 以山苍子无菌苗茎段诱导的愈伤组织为试验材料，研究不同激素浓度配比对山苍子愈伤组织诱导不定芽及不定芽生根的影响，探讨愈伤组织对潮霉素和头孢霉素的临界筛选浓度，并通过农杆菌介导法将外源基因导入山苍子愈伤组织中。 结果 筛选出诱导愈伤组织不定芽分化培养基为：MS + 2.0 mg·L⁻¹ 6-BA + 0.01 mg·L⁻¹ IBA + 0.05 mg·L⁻¹ TDZ，分化率为16.67%～36.67%；不定芽生根培养基为1/2MS + 0.5 mg·L⁻¹ IAA，生根率为97.33%。遗传转化初期筛选抗性愈伤组织的潮霉素浓度为5 mg·L⁻¹（约7～10 d），通过逐步增加潮霉素浓度至30 mg·L⁻¹进行筛选培养，头孢霉素最适浓度为300 mg·L⁻¹。采用农杆菌介导法将外源基因转入愈伤组织中，并设计PCR引物进行鉴定，共检测16株抗性苗均含有目的条带，表明目的基因已插入山苍子基因组中，转化率为0.67%。通过Southern检测表明，目的片段已插入山苍子愈伤组织中。 结论 初步建立山苍子再生及遗传转化体系，且已获得多个基因的抗性愈伤组织，为进一步开展基因功能研究及遗传改良提供技术支持。

在转录组测序结果分析基础上,以山鸡椒cDNA 为模板,克隆得到山鸡椒1-脱氧木酮糖-5-磷酸还原异构酶DXR 基因cDNA 全长,以山鸡椒基因组DNA 为模板,设计引物、扩增拼接后获得山鸡椒DXR 基因全长,命名为LcDXR。序列分析表明,LcDXR cDNA 全长为1 501 bp,5'非编码区长34 bp,3'非编码区长53 bp,开放阅读框长1 413 bp,预测编码含有470个氨基酸残基的蛋白质,等电点为6.62,分子量为51.12 kD。LcDXR 基因全长为12 601 bp,其中外显子12 个,内含子11 个。对来自10个种源的LcDXR 基因编码区单核苷酸变异位点进行分析表明:在cDNA 区间内共发现10 个SNP(single nucleotide polymorphism)位点,其中有4 个单核苷酸变异导致了所编码的氨基酸的改变,为了分析氨基酸突变导致的蛋白质精细结构的变化,利用Swiss-PDB Viewer 模拟4 个突变位点氨基酸残基的替换。其中江西安远(AY)的突变Lys119Thr 引起了氢键的变化,推测可能对酶的活性产生影响。研究结果为深入研究山鸡椒脱氧木酮糖5-磷酸还原异构酶的活性和功能奠定了基础,同时为山鸡椒遗传育种提供理论依据。

目的 对山苍子不同家系幼林生长性状进行遗传变异及稳定性分析，为山苍子优良家系选择及推广提供参考。 方法 以13个半同胞山苍子家系为材料，采用随机区组设计，分别在重庆万州、湖北京山和福建清流3个试验点营建家系试验林。对23年生山苍子幼林的树高和地径性状进行测定和多点联合分析，并采用AMMI模型对山苍子各家系的生长稳定性进行评价。 结果 （1）山苍子家系的树高和地径在家系和地点效应上均达到显著（0.01 < P < 0.05）或极显著（P < 0.01）水平，地径的家系和地点交互作用达到显著水平（0.01 < P < 0.05）；3个试验点树高和地径的表型变异系数为20.98%~29.27%，遗传变异系数为0.62%~20.35%，其中，地径的表型和遗传变异系数普遍大于树高；树高的家系遗传力为0.003~0.578，地径的家系遗传力为0.455~0.806。（2）综合双标图和稳定性参数得出：家系JY2和GX4地径表现较好且稳定性较高。 结论 山苍子家系的树高和地径在家系和地点间的差异均达到极显著水平（P < 0.01），存在丰富的遗传变异。在家系水平上，树高受低等到中等强度的遗传控制，地径受中等到高等强度的遗传控制。各家系在福建清流试点生长表现最好，湖北京山试点居次，重庆万州试点最差，其中家系JY2和GX4在3个试验点地径均表现较好且稳定性较高。

通过对山苍子幼嫩叶片、顶芽、花蕾3种组织的DNA提取效果分析和对影响酶切及选择性扩增效果的4个主要因素(酶切时间、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度)的比较研究,建立了适合于山苍子AFLP分析的技术体系。结果表明,山苍子的顶芽是较好的DNA提取材料;山苍子基因组DNA经5 U EcoR I和5 U Mse I酶切1 h即可完全酶切;最佳的选择性扩增体系为20 μL反应体系中含有1.0 U rTaq聚合酶、2.0 μL 10×PCR缓冲液、1.8 μL 25 mmol·L-1MgCl2、1.4 μL 2.5 mmol·L-1dNTP、100 ng·μL-1引物各1.0 μL。使用该反应体系获得了清晰、稳定的DNA指纹图谱,并筛选出10对多态性较好的AFLP引物组合,为利用AFLP标记技术进一步开展山苍子种群遗传结构、遗传分化等研究奠定了基础。

在油桐遗传多样性研究中,为了获得清晰可靠、重复性强的ISSR扩增结果,综合采用单因子试验和正交设计两种方法对影响油桐ISSR-PCR反应结果的4个因素( Taq酶、Mg2+ 、dNTP、引物)进行优化试验。单因子试验分别研究各因素对ISSR-PCR反应的影响,找出最佳反应水平。正交设计选用L9 (34 )方案,采用直观分析获得影响因素最佳反应水平。通过综合比较分析,最终建立了油桐ISSR2PCR反应的最佳反应体系,即在20μL反应体系中, Taq DNA聚合酶1. 0 U,Mg2+ 2. 0 mmol·L-1 , dNTP 0. 20 mmol·L-1 ,引物0. 4μmol·L-1 , 1 ×PCR缓冲液, 40 ng模板DNA。

To identify the physiological function of Diacylglycerol Acyltransferase 2 (DGAT2) coding gene in the process of tung oil biosynthesis, DGAT2 was cloned from cDNA of tung tree kernel and then linked with pMD18-T vector for sequencing. The 969bp fragment containing Open Reading Frame was acquired. Subsequently, RNAi binary expression vector pD35-DGAT2 was constructed, which expressed DGAT2 in two opposite ways. The studies provide the possibilities to further identify the function of DGAT2 in tung oil biosynthesis by RNAi technology and hold promise for genetic engineering of Venicia fordii.

为奠定油桐蛋白质组学研究的基础,针对影响油桐种仁蛋白质分离效果的几个重要因素进行单因素优化实验,建立了油桐种仁蛋白质组分离效果良好的双向电泳技术平台。实验结果显示:采用TCA-丙酮结合酚抽法提取的油桐种仁蛋白质,经裂解液(7 mol·L-1尿素,2 mol·L-1 硫脲,4% CHAPS, 65 mmol·L-1 DTT,2% IPG buffer)裂解之后,上样700 μg聚焦70 000 Vh,经过SDS-PAGE电泳(分离胶浓度15%,恒功率5 W,电泳时间8 h)后有良好的分离效果,能满足开展后续蛋白质组学研究的实验要求。

The annual growth rhythm of Litsea cubeba seedling was studied. The average thousand-grain weight of L. cubeba was 35 g, and the germination rate was higher than 70%. The results of cluster analysis showed that, the growth period could be divided into 4 stages, i.e. the stage of seedling emergence (from March 2 to March 17), the initial stage of growth (from March 18 to May 31), the vigorous growth stage (from June 11 to August 29) and the late growth stage (from August 30 to December 27). The height and diameter of one-year-old seedling were fit with logistic curve law, and the growth process followed a "slow-fast-slow" curve. The equation of average daily growth showed that the fastest growth appeared in July which had the highest monthly average temperature. This conclusion provided a reference for the seedling stage management of L. cubeba forest. The authors recommend vigorously developing L. cubeba forest in the mountainous area of Guizhou Province, and providing scientific and technological support to the forest tenure reform.

植物种子中，油脂主要贮藏在一种分散的、相对稳定的亚细胞微滴“油体”中，油质蛋白Oleosin是油体结构组成和功能调节的最主要蛋白质，在种子成熟、休眠和萌发过程中发挥重要作用。通过油桐种仁EST文库构建与测序，获得了油桐Oleosin（OLE）蛋白编码基因的5个转录本VfOLE1、VfOLE2、VfOLE3、VfOLE4、VfOLE5，完整阅读框长度分别为474、465、414、414、429 bp。通过实时荧光定量PCR技术分析了5个VfOLE转录本在油桐不同组织以及种仁成熟过程中的表达变化。结果表明，5个VfOLE转录本在成熟的种子中特异高效表达，其它组织中微弱表达；5个VfOLE表达趋势与桐酸、桐油积累趋势一致，其中在桐酸快速合成、桐油快速积累时期，VfOLE1、VfOLE2表达迅速上升并且表达量显著高于VfOLE3、VfOLE4、VfOLE5。试验结果为进一步研究VfOLE基因在桐油合成中的生物学功能提供了参考。